1. साधन का पता लगाने का प्रवाह
विचार करने वाली पहली बात यह है कि प्रयोगशाला को कितनी बार मात्रात्मक पीसीआर उपकरण का उपयोग करने की आवश्यकता होती है। कैलिफोर्निया विश्वविद्यालय, सैन फ्रांसिस्को कैंसर सेंटर में जीनोम विश्लेषण उपकरण के प्रमुख डेविड गिंजिंगर ने बाजार पर अधिकांश मात्रात्मक पीसीआर मशीनों का परीक्षण किया है। उन्होंने कहा कि अगर बड़े पैमाने पर इसका इस्तेमाल नहीं किया जाता है, उदाहरण के लिए, यह मुख्य रूप से ज्ञात जीनों का परीक्षण करने के लिए उपयोग किया जाता है, तो इसे महंगे महंगे उत्पादों की आवश्यकता नहीं होती है। लेकिन उन प्रयोगशालाओं के लिए जिन्हें नए दवा लक्ष्य और रोग चिह्नक खोजने की आवश्यकता है, उन्हें ऐसे उपकरणों की आवश्यकता है जो 384 अच्छी तरह से प्लेटों को पकड़ सकें और तेजी से चल सकें। हालांकि, केवल इतना उच्च-थ्रूपुट उपकरण पर्याप्त तेज़ नहीं है, और आप पाएंगे कि नमूना तैयार करना दर सीमित करने के लिए बाधा बन जाता है। इसलिए, उच्च-थ्रूपुट प्रयोगशालाओं को अक्सर अधिक स्वचालित उपकरणों की आवश्यकता होती है। जब तक बटन दबाया जाता है, उपकरण स्वचालित रूप से नमूनों की प्रक्रिया करेगा, न्यूक्लिक एसिड को शुद्ध करेगा और पीसीआर टेम्पलेट तैयार करेगा।
2. एकाधिक प्रवर्धन की क्षमता
एकाधिक प्रवर्धन गर्म हो रहा है। रीयल-टाइम मात्रात्मक पीसीआर उपकरण प्रतिरक्षा नहीं है। हाई-एंड क्वांटिटेटिव पीसीआर इंस्ट्रूमेंट में कई डिटेक्शन चैनल होते हैं, इसलिए इंस्ट्रूमेंट एक ही सैंपल टैंक में कई टेम्प्लेट की एम्पलीफिकेशन प्रक्रिया का पता लगा सकता है। नए LightCycler2.0 में 6 डिटेक्शन चैनल हैं, जो मूल से 3 ज्यादा हैं। SmartCyclerⅡ में 4 डिटेक्शन चैनल हैं। Stratagene, जो अपने पुस्तकालय उत्पादों के लिए प्रसिद्ध है, में एक मात्रात्मक PCR उपकरण Mx3000P भी है, जो Roche की कीमत से आधे से भी कम है और एक अच्छी प्रतिष्ठा है, यानी 4 डिटेक्शन चैनल। हालाँकि, एकाधिक प्रवर्धन सभी के लिए उपयुक्त नहीं है क्योंकि यह प्रयोग को जटिल बनाता है।
3. सॉफ्टवेयर
जब आप मात्रात्मक पीसीआर उपकरण चुनने के लिए तैयार हों, तो आपको संलग्न सॉफ्टवेयर की जांच करनी चाहिए। क्या इसका उपयोग करना सुविधाजनक है, क्या आप आवश्यक विश्लेषण कर सकते हैं, कई आउटपुट स्वरूप हैं। हालाँकि, आपको इस बात पर ध्यान देने की आवश्यकता है कि क्या सॉफ्टवेयर जो उपयोग करने में बहुत आसान है, फ़ंक्शन में अपेक्षाकृत सरल है और जटिल गणना नहीं कर सकता है। पिछले सॉफ़्टवेयर के लिए आपको और विश्लेषण करने की आवश्यकता है। नया सॉफ्टवेयर पहले से ही सब कुछ संभाल सकता है। बुनियादी कार्यों के अलावा, कुछ सॉफ़्टवेयर में अधिक कार्य भी हो सकते हैं, जैसे प्राइमर और जांच डिज़ाइन, एकाधिक विश्लेषण डिज़ाइन, पृष्ठभूमि सुधार, डेटा सामान्यीकरण आदि। रोशे के अनुप्रयुक्त विज्ञान विभाग के अनुप्रयोग और तकनीकी सेवा विभाग के प्रमुख विलियन डेमियन ने जोर देकर कहा कि मात्रात्मक पीसीआर ज्यामितीय प्रवर्धन की एक प्रक्रिया है। शुरुआत में, एक प्रतिलिपि अंतर होता है, और परिणाम ज्यामितीय क्रम से भिन्न होते हैं।
4. लचीलापन
बड़े पैमाने पर व्यस्त प्रयोगशाला उपकरण निश्चित रूप से ईर्ष्यापूर्ण हैं, और पारंपरिक प्रयोगशालाओं में भी अद्भुत विकल्प हो सकते हैं। वर्तमान आपूर्तिकर्ताओं के पास कई तकनीकी विशेषज्ञ हैं, न केवल आपकी वर्तमान जरूरतों को समझने के लिए, बल्कि भविष्य की मांग में संभावित परिवर्तनों पर विचार करने के लिए भी बहुत विचारशील हैं, जैसे विभिन्न प्रकार के अपग्रेड करने योग्य सामान और मॉड्यूल प्रदान करना। BioRad का MyCycler मॉड्यूल का चयन कर सकता है और रीयल-टाइम क्वांटिफिकेशन में अपग्रेड कर सकता है। एबीआई के क्वांटिटेटिव पीसीआर इंस्ट्रूमेंट में कई तरह के सैंपल टैंक हैं, जो कुछ उच्च-थ्रूपुट आवश्यकताओं को पूरा करने के लिए 96-वेल टैंक को डबल 384-वेल टैंक में बदल सकते हैं। उन प्रयोगशालाओं के लिए जिन्होंने अभी छोटी मात्रा में qPCR करना शुरू किया है, SmartCycler II क्वांटिटेटिव PCR इंस्ट्रूमेंट एक अच्छा विकल्प है। एक बुनियादी मॉड्यूल में 16 स्वतंत्र तापमान नियंत्रण नमूना टैंक होते हैं, और 16 पूरी तरह से स्वतंत्र अलग-अलग प्रयोग एक ही समय में या पहले और बाद में किए जा सकते हैं। "अभिगम"; जब प्रयोगशाला को बड़े पैमाने पर प्रयोग की आवश्यकता होती है, तो इसे बहुत आर्थिक रूप से उन्नत किया जा सकता है, 1 से 6 बुनियादी मॉड्यूल तक, जो कि 96 नमूना कुएँ हैं। हालांकि 96-वेल प्लेट्स का उपयोग नहीं किया जा सकता है, जब कोई छात्र थोड़ी मात्रा में प्रयोग शुरू करता है, तो अन्य लोग भी अपने स्वयं के स्वतंत्र प्रयोग शुरू करने के लिए किसी भी समय प्लग इन कर सकते हैं, और वे एक-दूसरे के साथ हस्तक्षेप नहीं करते हैं, जिससे लचीलापन बढ़ता है। यह उन प्रयोगशालाओं के लिए एक बहुत ही लचीला विकल्प है, जिनमें प्रयोगों की संख्या बहुत कम होती है और शुरुआत में एक तंग बजट होता है।
5. अनिश्चितता
हालांकि सॉफ्टवेयर को आंशिक रूप से ठीक किया जा सकता है, गणना की तुलना में इतने सारे गणना सुधारों की आवश्यकता के बिना कम व्यवस्थित त्रुटियों वाला एक उपकरण खरीदना बेहतर है। सिंजिंगर का मानना है कि उपकरण के नमूना कुओं के बीच के अंतर पर विशेष ध्यान दिया जाना चाहिए। नमूना छेद के बीच प्रसिद्ध तापमान अंतर के अलावा, नमूना छेद और पता लगाने की जांच के बीच ऑप्टिकल पथ दूरी में भी छोटे अंतर हैं, सिग्नल भेजने और प्राप्त करने और संचारण के लिए जिम्मेदार फाइबर की लंबाई में मामूली अंतर , लेंस और सैंपल होल के बीच की दूरी और कोण में छोटा अंतर, और यहां तक कि सिग्नल ट्रांसमिशन पर सैंपल सेल का प्रभाव। Cinzinger ने व्यावसायिक रूप से उपलब्ध मात्रात्मक PCR उपकरणों में से अधिकांश पर एक ही परीक्षण किया है। वह उपकरण के प्रत्येक कुएं में वास्तविक समय में समान नमूनों और अभिकर्मकों को बढ़ाता है। दुर्भाग्य से, कई बार, अलग-अलग नमूना कुओं के बीच अलग-अलग परिणाम होंगे।
6. किट का चयन
हालांकि बिक्री कर्मचारी उत्कृष्ट गुणवत्ता नियंत्रण किट का दावा करेंगे और समाधान एक-एक परिणाम प्राप्त करेंगे, लेकिन ऑफ-द-शेल्फ किट की खरीद मतभेदों का समाधान नहीं है। गंभीर मूल्यांकन प्रयोग और विश्लेषणात्मक प्रयोग समाधान हैं।
