I. ऑपरेशन: एनारोबिक माहौल बनाना
1. मिक्स्ड नाइट्रोजन और कंबाइंड गैस सिलेंडर के आउटपुट प्रेशर को एडजस्ट करना: प्रेशर कम करने वाले वाल्व को लगभग 0.1 MPa पर एडजस्ट करें।
2. पावर स्विच और टेम्परेचर कंट्रोलर चालू करें, मनचाहा टेम्परेचर एडजस्ट करें। ऑपरेटिंग चैंबर में इनक्यूबेटर के अंदर का टेम्परेचर अपनी मर्ज़ी से चुना और कंट्रोल किया जा सकता है।
3. इस्तेमाल की ज़रूरतों के हिसाब से ज़रूरी एक्सेसरीज़ और इक्विपमेंट रखें, और ऑपरेटिंग चैंबर में दो नॉन-टॉक्सिक प्लास्टिक बैग डालें।
4. ऑपरेटिंग चैंबर में 1000g सूखे पैलेडियम दाने (सील किए हुए) और 500g डेसिकेंट, एक एनारोबिक इंडिकेटर (सील किया हुआ) के साथ रखें।
5. सैंपलिंग चैंबर के अंदर और बाहर के दरवाज़े कसकर बंद करें और वैक्यूम चेक करें।
6. ऑपरेटिंग चैंबर में सेकेंडरी नाइट्रोजन रिप्लेसमेंट:
(1) ऑपरेटिंग चैंबर के एयर इनलेट में एक रबर ट्यूब डालें, और दूसरा सिरा एक प्लास्टिक बैग में डालें।
(2) नाइट्रोजन इनलेट को कनेक्ट करें, नाइट्रोजन कंट्रोल वाल्व खोलें, दोनों प्लास्टिक बैग को नाइट्रोजन से भरें, और फिर बैग के छेदों को कसकर बांध दें।
(3) ऑब्जर्वेशन पैनल के फ्लैंज रिंग पर लेटेक्स ग्लव्स पहनें और उन्हें कसकर बांध दें।
(4) प्लास्टिक बैग से नाइट्रोजन को धीरे-धीरे ऑपरेटिंग चैंबर में तब तक छोड़ें जब तक सारा नाइट्रोजन निकल न जाए।
7. ऑपरेटिंग चैंबर में सेकेंडरी नाइट्रोजन रिप्लेसमेंट: नाइट्रोजन भरने की प्रक्रिया को दोहराएं, और किसी भी समय एग्जॉस्ट वाल्व को खोलने और बंद करने पर ध्यान दें।
8. ऑपरेटिंग चैंबर में टर्शियरी मिक्स्ड गैस रिप्लेसमेंट:
(मिक्स्ड गैस रेश्यो: N2 90%; H2 5%; CO2 5%).
(1) गैस का रास्ता बदलें, मिक्स्ड गैस इनलेट वाल्व खोलें, और भरते समय कभी भी एग्जॉस्ट वाल्व खोलें और बंद करें।
(2) मिक्स्ड गैस के प्लास्टिक बैग भरने के बाद, मिक्स्ड गैस स्ट्रेट-थ्रू वाल्व (थ्री-वे वाल्व) बंद कर दें।
(3) मिक्स्ड गैस को धीरे-धीरे प्लास्टिक बैग से ऑपरेटिंग चैंबर में छोड़ें।
(4) तीन एयर एक्सचेंज के बाद, ऑपरेटिंग चैंबर में ऑक्सीजन की मात्रा बहुत कम हो जाती है।
9. ऑपरेटिंग चैंबर में पैलेडियम ग्रेन्यूल ऑक्सीजन स्कैवेंजर चालू करें और पावर सप्लाई को ऑक्सीजन कैटेलिटिक डीऑक्सीजनेशन डिवाइस से कनेक्ट करें। एक घंटे के बाद, एनारोबिक इंडिकेटर स्ट्रिप का रंग बदलें। रंग बदलने का मतलब है कि ऑपरेटिंग चैंबर एनारोबिक माहौल में पहुँच गया है।
10. चैंबर को स्टेरिलाइज़ करने के लिए अल्ट्रावॉयलेट स्टेरिलाइज़ेशन लैंप चालू करें। स्टेरिलाइज़ेशन का समय यूज़र तय करता है।
II. बैक्टीरियल स्ट्रेन को रखना और कल्टीवेशन करना
1. सैंपलिंग चैंबर का दरवाज़ा चेक करें और बंद करें।
2. सैंपलिंग चैंबर का बाहरी दरवाज़ा खोलें, बैक्टीरियल स्ट्रेन को सैंपलिंग चैंबर में रखें, और फिर बाहरी दरवाज़ा बंद कर दें।
3. सैंपलिंग चैंबर में तीन नाइट्रोजन पर्जिंग और रिप्लेसमेंट प्रोसेस करें: पहले, 500 mmHg (66 kPa) या उससे ज़्यादा के वैक्यूम लेवल तक खाली करें, फिर अगले ऑपरेशन पर जाने से पहले पॉइंटर को ज़ीरो पर वापस जाने देने के लिए नाइट्रोजन वाल्व को मैन्युअल रूप से खोलें।
4. अगर कम वैक्यूम लेवल चुना जाता है, तो रिप्लेसमेंट साइकिल की संख्या बढ़ानी होगी।
5. सैंपलिंग रूम के दरवाज़े खोलने और बंद करने के बाद, जांच और मदद के लिए 100 mmHg (13 kPa) का कम वैक्यूम लगाना चाहिए।
6. एनारोबिक इनक्यूबेटर के लंबे समय तक लगातार इस्तेमाल के लिए शर्तें:
(1) ऑपरेटिंग रूम में एनारोबिक इंडिकेटर बार को रोज़ाना देखें। अगर नॉर्मल है, तो इसका इस्तेमाल जारी रखा जा सकता है। अगर एबनॉर्मल है, तो हवा बदलनी होगी।
(2) थोड़ी मात्रा में मिक्स्ड गैस लगातार डालनी चाहिए ताकि यह पक्का हो सके कि मिलाई गई हाइड्रोजन कैटेलिटिक एब्जॉर्प्शन के लिए ऑक्सीजन की थोड़ी मात्रा के साथ मिल जाए, जिससे एनारोबिक स्टेट बनी रहे। मिक्स्ड गैस का फ्लो रेट लगभग 10 ml प्रति मिनट होना चाहिए।
(3) लगातार इनक्यूबेशन के हर 3 दिन में डेसिकेंट और डेसिकेंट बदलें।
7. इनोक्यूलेशन रॉड स्टेरिलाइज़र का इस्तेमाल:
(1) स्टेरिलाइज़ेशन (इनोक्यूलेशन रॉड का) के लिए निकेल-क्रोमियम हीटिंग वायर का इस्तेमाल करके शॉर्ट-सर्किट करें और इसे रेड-हॉट स्टेट तक गर्म करें।
(2) वैक्स मेल्टिंग पॉइंट को सीधे इनोक्यूलेशन रॉड पर रखा जा सकता है, और वैक्स को पिघलाने के लिए टेस्ट ट्यूब सीलिंग वैक्स ओपनिंग को घुमाया जा सकता है।