पीसीआर: पॉलीमरेज़ चेन रिएक्शन, जो 95 डिग्री सेल्सियस पर इन विट्रो में डी.एन.ए. का उपयोग खोलना (डिनेचर) करना है। 55 डिग्री सेल्सियस पर, प्राइमर और एकल किस्में आधार पूरक युग्मन के सिद्धांत के अनुसार संयुक्त (एनीलिंग) हैं, और फिर तापमान को लगभग 72 डिग्री सेल्सियस तक समायोजित किया जाता है, डीएनए पोलीमरेज़ फॉस्फोरिक एसिड से दिशा के साथ पूरक किस्में (विस्तार) को संश्लेषित करता है पाँच कार्बन शर्करा (5'-3')।
पीसीआर उपकरण वास्तव में एक तापमान नियंत्रण उपकरण है, जो 95 डिग्री सेल्सियस, 55 डिग्री सेल्सियस और 72 डिग्री सेल्सियस के बीच तापमान नियंत्रण अच्छी तरह से कर सकता है।
डीएनए प्रवर्धन और पहचान मानकों के उद्देश्य के अनुसार, पीसीआर उपकरणों को विभाजित किया जा सकता है: साधारण पीसीआर उपकरण, ग्रेडिएंट पीसीआर उपकरण, इन-सीटू पीसीआर, वास्तविक समय फ्लोरोसेंट मात्रात्मक पीसीआर उपकरण, आदि।
①साधारण पीसीआर मशीन
आम तौर पर, एक पीसीआर मशीन जो पीसीआर प्रवर्धन के लिए केवल एक विशिष्ट एनीलिंग तापमान चला सकती है, उसे साधारण पीसीआर मशीन कहा जाता है, जो एक पारंपरिक पीसीआर मशीन भी है। यदि आप इसे अलग-अलग एनीलिंग तापमान के लिए उपयोग करना चाहते हैं, तो आपको इसे कई बार चलाने की आवश्यकता है।
साधारण पीसीआर मशीनों का उपयोग मुख्य रूप से वैज्ञानिक अनुसंधान, शिक्षण, नैदानिक चिकित्सा, निरीक्षण, संगरोध आदि में किया जाता है।
②ग्रेडिएंट पीसीआर इंस्ट्रूमेंट
एक बार का पीसीआर प्रवर्धन ग्रेडिएंट पीसीआर इंस्ट्रूमेंट कहे जाने वाले विभिन्न एनीलिंग तापमान स्थितियों (आमतौर पर 12 तापमान ग्रेडिएंट्स) की एक श्रृंखला निर्धारित कर सकता है। अलग-अलग डीएनए अंशों में अलग-अलग इष्टतम एनीलिंग तापमान होते हैं। प्रवर्धन के लिए ग्रेडिएंट एनीलिंग तापमान की एक श्रृंखला सेट करके, एक बार का पीसीआर प्रवर्धन प्रभावी प्रवर्धन के लिए उच्च अभिव्यक्ति स्तर के साथ सबसे उपयुक्त एनीलिंग तापमान को प्रदर्शित कर सकता है।
ग्रेडियेंट पीसीआर उपकरण मुख्य रूप से अज्ञात डीएनए एनीलिंग तापमान के प्रवर्धन का अध्ययन करने के लिए प्रयोग किया जाता है, जो समय और लागत बचाता है। इसे ग्रेडिएंट सेट किए बिना सामान्य पीसीआर के रूप में भी इस्तेमाल किया जा सकता है। ग्रेडिएंट पीसीआर इंस्ट्रूमेंट का इस्तेमाल ज्यादातर वैज्ञानिक अनुसंधान, शिक्षण संस्थानों, निरीक्षण, संगरोध आदि में किया जाता है।
③इन-सीटू पीसीआर मशीन
पीसीआर जीन प्रवर्धन प्रतिक्रिया के लिए कोशिकाओं या ऊतकों से डीएनए निकालने के लिए है, जबकि सीटू पीसीआर कोशिकाओं या ऊतकों की अखंडता को बनाए रखने के लिए है, पीसीआर प्रतिक्रिया प्रणाली को ऊतकों और कोशिकाओं में प्रवेश कराती है, और सेल के लक्ष्य डीएनए के स्थान पर जीन का प्रदर्शन करती है। . प्रवर्धन। न केवल लक्ष्य डीएनए का पता लगाया जा सकता है, बल्कि लक्ष्य डीएनए में सेल का प्रकार भी मौजूद है, जो लक्ष्य डीएनए और सेल के बीच संबंधों की खोज करने के लिए अधिक अनुकूल है।
इन-सीटू पीसीआर उपकरण का मुख्य रूप से उपयोग किया जाता है: (1) बहिर्जात जीन अंशों का पता लगाना, पता लगाने की दर में वृद्धि, वायरल संक्रमणों के निरीक्षण पर ध्यान केंद्रित करना, जैसे कि एचआईवी, एचपीवी, एचबीवी, सीएमवी, आदि; (2) शरीर कानून में रोगजनकों के वितरण का अवलोकन करना (3) अंतर्जात जीन के टुकड़े, जैसे कि मानव मोनोजेनिक रोग, पुनः संयोजक जीन, ट्रांसलोकेटेड क्रोमोसोम, आईजी एमआरएनए टुकड़े, ऑन्कोजीन के टुकड़े, आदि। (4) पेश किए गए जीन का पता लगाना; (5) β-थैलेसीमिया जैसे आनुवंशिक रोगों का पता लगाना।
④ रीयल-टाइम फ्लोरोसेंट मात्रात्मक पीसीआर उपकरण
प्रतिदीप्ति मात्रात्मक फ़ंक्शन के साथ एक पीसीआर उपकरण बनाने के लिए साधारण पीसीआर उपकरण डिजाइन के आधार पर फ्लोरोसेंट सिग्नल अधिग्रहण प्रणाली और कंप्यूटर विश्लेषण और प्रसंस्करण प्रणाली को जोड़ा जाता है। पीसीआर प्रवर्धन का सिद्धांत सामान्य पीसीआर प्रवर्धन के समान है। पीसीआर प्रवर्धन के दौरान जोड़े गए प्राइमर को आइसोटोप, फ्लोरेसिन आदि के साथ लेबल किया जाता है, और प्राइमर और फ्लोरोसेंट जांच का उपयोग विशेष रूप से प्रवर्धन के लिए एक ही समय में टेम्पलेट से बाँधने के लिए किया जाता है। प्रवर्धित परिणाम प्रतिदीप्ति संकेत अधिग्रहण प्रणाली के वास्तविक समय अधिग्रहण संकेत के माध्यम से कंप्यूटर विश्लेषण और प्रसंस्करण प्रणाली से जुड़ा है, और मात्रात्मक वास्तविक समय परिणाम आउटपुट प्राप्त किया जाता है।
प्रतिदीप्ति मात्रात्मक पीसीआर मशीनों को एकल चैनल, दोहरे चैनल और मल्टी-चैनल में विभाजित किया गया है। जब लेबलिंग के लिए केवल एक फ्लोरोसेंट जांच का उपयोग किया जाता है, तो एकल चैनल का उपयोग करें; जब कई फ्लोरोसेंट लेबल हों, तो कई चैनलों का उपयोग करें। एक एकल चैनल बहु-प्रतिदीप्ति मार्करों और लक्ष्य जीन अभिव्यक्ति उत्पादों का भी पता लगा सकता है, क्योंकि एक समय में केवल एक लक्ष्य जीन प्रवर्धन राशि का पता लगाया जा सकता है, और विभिन्न लक्ष्य जीन अंशों की मात्रा का पता लगाने के लिए कई प्रवर्धन की आवश्यकता होती है। मल्टी-चैनल मल्टीप्लेक्स पीसीआर के लिए अनुकूल हैं और एक समय में कई लक्ष्य जीनों का पता लगाने के कार्य को महसूस करते हैं।
प्रतिदीप्ति मात्रात्मक पीसीआर साधन मुख्य रूप से नैदानिक चिकित्सा परीक्षण, बायोमेडिसिन अनुसंधान और विकास, खाद्य उद्योग, वैज्ञानिक अनुसंधान संस्थानों आदि में उपयोग किया जाता है। प्रतिदीप्ति मात्रात्मक पहचान तकनीक में नैदानिक निदान के कई पहलू हैं, मुख्य रूप से विभिन्न रोगजनकों के कारण होने वाले रोगों के नैदानिक निदान पर ध्यान केंद्रित करते हैं। जैसे कि हेपेटाइटिस रोग, यौन रोग, प्रसवपूर्व और प्रसवोत्तर देखभाल से संबंधित रोग, और तपेदिक।
