प्रवर्धन विधि:
इज़ोटेर्मल प्रतिदीप्ति पीसीआर: इज़ोटेर्मल प्रतिदीप्ति पीसीआर में, डीएनए प्रवर्धन एक स्थिर तापमान पर होता है। इसका मतलब यह है कि पूरी प्रक्रिया के दौरान प्रतिक्रिया एक ही, स्थिर तापमान पर होती है।
वास्तविक समय पीसीआर: वास्तविक समय पीसीआर, जिसे मात्रात्मक पीसीआर (क्यूपीसीआर) भी कहा जाता है, एक थर्मल साइक्लिंग प्रक्रिया का उपयोग करता है। इसमें कई तापमान चक्र शामिल हैं, जिनमें विकृतीकरण, एनीलिंग और विस्तार चरण शामिल हैं। ये तापमान चक्र आमतौर पर थर्मल साइक्लर मशीन द्वारा नियंत्रित होते हैं।
तापमान नियंत्रण:
इज़ोटेर्मल प्रतिदीप्ति पीसीआर: जैसा कि नाम से पता चलता है, इज़ोटेर्मल प्रतिदीप्ति पीसीआर प्रतिक्रिया के दौरान एक स्थिर तापमान बनाए रखता है, आमतौर पर 60-65 ℃ के आसपास। यह वास्तविक समय पीसीआर की तुलना में प्रतिक्रिया के लिए आवश्यक उपकरण को सरल बनाता है।
वास्तविक समय पीसीआर: वास्तविक समय पीसीआर में थर्मल साइक्लिंग शामिल होती है, जहां तापमान को विभिन्न स्तरों के बीच बार-बार बदला जाता है (उदाहरण के लिए, लगभग 95 ℃ पर विकृतीकरण, लगभग 55-65 ℃ पर एनीलिंग, और लगभग 72 ℃ पर विस्तार)। इसके लिए सटीक तापमान नियंत्रण वाले थर्मल साइक्लर की आवश्यकता होती है।
पता लगाने की विधि:
इज़ोटेर्मल प्रतिदीप्ति पीसीआर: प्रतिदीप्ति पहचान का उपयोग इज़ोटेर्मल प्रतिदीप्ति पीसीआर और वास्तविक समय पीसीआर दोनों में किया जाता है। हालाँकि, इज़ोटेर्माल प्रतिदीप्ति पीसीआर में, प्रतिदीप्ति संकेतों को आमतौर पर विभिन्न तापमान चरणों के बीच चक्रण की आवश्यकता के बिना लगातार पता लगाया जाता है।
वास्तविक समय पीसीआर: वास्तविक समय पीसीआर में, तापमान परिवर्तन के प्रत्येक चक्र (आमतौर पर एनीलिंग/विस्तार चरण के बाद) के बाद प्रतिदीप्ति संकेतों को मापा जाता है। यह डीएनए प्रवर्धन की वास्तविक समय की निगरानी की अनुमति देता है क्योंकि यह थर्मल साइक्लिंग प्रक्रिया के दौरान होता है।
अनुप्रयोग:
इज़ोटेर्मल फ़्लोरेसेंस पीसीआर: यह तकनीक कुछ अनुप्रयोगों के लिए उपयुक्त है, जैसे कि रैपिड पॉइंट-ऑफ़-केयर परीक्षण, जहां सादगी और गति आवश्यक है। इसका उपयोग विशिष्ट डीएनए अनुक्रमों की गुणात्मक पहचान के लिए किया जा सकता है।
वास्तविक समय पीसीआर: वास्तविक समय पीसीआर का व्यापक रूप से डीएनए के गुणात्मक और मात्रात्मक विश्लेषण दोनों के लिए उपयोग किया जाता है। यह अत्यधिक संवेदनशील है और एक नमूने में डीएनए की प्रारंभिक मात्रा को मापने की अनुमति देता है, जो इसे जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण, वायरल लोड मात्रा का ठहराव और जीनोटाइपिंग जैसे अनुप्रयोगों के लिए उपयोगी बनाता है।
संक्षेप में, इज़ोटेर्माल प्रतिदीप्ति पीसीआर और वास्तविक समय पीसीआर के बीच मुख्य अंतर तापमान नियंत्रण और प्रवर्धन विधि है। इज़ोटेर्मल प्रतिदीप्ति पीसीआर पूरी प्रतिक्रिया के दौरान एक स्थिर तापमान बनाए रखता है और सरल, तेज़ अनुप्रयोगों के लिए उपयुक्त है, जबकि वास्तविक समय पीसीआर में थर्मल साइक्लिंग शामिल है और इसका उपयोग मात्रात्मक और गुणात्मक डीएनए विश्लेषण अनुप्रयोगों की एक विस्तृत श्रृंखला के लिए किया जाता है।